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1.概述

腎間質纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）是各種原因的慢性腎臟疾病發(fā)展到后期的共同病理學表現(xiàn)，是造成慢性腎臟疾病的主要原因^[1]。目前研究認為RIF病理過程是在炎癥、缺血、缺氧等因素作用下，成纖維細胞活化增殖，轉分化為肌成纖維細胞并分泌Ⅰ型膠原，最終導致細胞外基質在間質內過度沉積，使腎功能減退直至腎衰竭^[2]。腎間質纖維化主要的病理特征有：肌成纖維細胞增殖和活化，細胞外基質大量沉積，腎小管損傷和炎性細胞浸潤^[3-4]。

2.腎間質纖維化的模型復制

單側輸尿管梗阻（Unilateral Uretera Obstruction，即UUO法）大鼠模型是經(jīng)典的腎間質纖維化模型，通過結扎單側輸尿管引起腎血流動力學和代謝的明顯改變，可在短期內造成RIF的病理特點，十分接近人類RIF自發(fā)的病理過程^[2]。因此本研究通過結扎單側輸尿管，成功復制了腎間質纖維化模型。

3.腎間質纖維化模型的樣本采集及處理

對假手術組和模型組SD大鼠進行解剖，取左側腎臟，于10%中性福爾馬林溶液固定，取材，包埋和切片，并分別進行HE染色、Masson染色和免疫組化I型膠原染色。

4.腎間質纖維化模型的病理學評價標準

以送檢組織的不同形態(tài)學改變?yōu)榛A，建立了相關病理學評價標準。其中HE染色的組織切片采用腎臟損傷評分標準進行病理學評分。特殊染色組織切片采用image plus進行光密度值計算觀察腎臟組織形態(tài)學變化，具體評分標準和面積計算方法如下：

HE染色評分標準：將腎臟組織病變分類，分別對各種類型病變進行評分，對各類型得分及動物總得分進行統(tǒng)計。具體病變類型和病變程度及評分標準詳見表1。

Masson染色：以腎臟陽性染色的面積占腎臟總面積百分比計算。半定量評分標準為：0分：無陽性；1分：1％～25％；2分：25％～50％；3分：50％～75％，4分：75％～100％。

5.腎間質纖維化模型顯微鏡下觀察結果

HE染色結果：假手術組大鼠腎小管結構排列整齊，腎小球形態(tài)規(guī)則，間質正常，未見炎性細胞浸潤。模型對照組大鼠可見腎小管變性、腎小管壞死，腎小管萎縮，腎間質炎癥和腎間質纖維化。

Masson染色結果：假手術組只在腎小管毛細血管周圍、系膜區(qū)及腎小球基底膜可見少量膠原；模型對照組大鼠腎臟間質可見Masson陽性染色，較假手術組有大量膠原形成，間質增寬，纖維化成灶狀分布，腎間質纖維化程度明顯加重。

I型膠原染色結果：假手術組只在血管周圍可見少量膠原；模型對照組大鼠腎臟間質可見I型膠原陽性染色，較假手術組腎間質I型膠原沉積程度明顯加重。

6.參考文獻

[1] 吳君，荊雪寧，沈偉等. 五苓散通過TGF-β1/Smad通路抗大鼠腎間質纖維化的機制研究[J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2022,33(05):607-615.

[2] 樓曉慧，南麗紅，彭衛(wèi)華等. 筋骨草總黃酮對單側輸尿管梗阻模型大鼠腎間質纖維化的抑制作用[J]. 福建中醫(yī)藥, 2022,53(06):34-37.

[3] 黃笛，張曉文，譚穎穎. 芪蛭真武湯改善單側輸尿管結扎模型大鼠腎間質纖維化的實驗研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2021,48(08):217-220+261-263.

[4] 高海洋，何海蘭，張立國，等. QDPR通過調控Beclin1改善UUO誘導的大鼠腎間質纖維化[J].安徽醫(yī)科大學學報,2023,58(05):806-811..